Determinación de anticuerpos anti-dsDNA: evaluación del desempeño de un inmunoensayo quimioluminiscente y correlación con el método de inmunofluorescencia indirecta / Detection of anti-dsDNA antibodies: evaluation of performance of a chemiluminescent immunoassay and correlation to the indirect immunofluorescence assay / Determinação de anticorpos anti-dsDNA: avaliação do desempenho de um imunoensaio quimioluminiscente e correlação com o método de imunoflourescência indireta

Resumen La determinación de anticuerpos anti-dsDNA es de utilidad para el diagnóstico y seguimiento clínico de pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES) y es uno de los criterios de clasificación del SLICC-2012. El objetivo del estudio fue verificar el desempeño del inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA) QUANTA Flash dsDNA y compararlo con el método en uso de inmunofluorescencia indirecta en Crithidia luciliae (CLIFT). Se analizaron con ambos métodos 195 pacientes con diagnóstico de enfermedades del tejido conectivo y solicitud de anticuerpos anti-dsDNA. Se obtuvieron 38 sueros positivos, 133 negativos y 24 (12,3%) discordantes. Entre estos resultados discordantes, hubo 17 que correspondieron a pacientes con LES y se agruparon en 16 CLIA+/CLIFT- y 1 CLIA-/CLIFT+. Se verificó el desempeño para precisión siguiendo el protocolo EP15-A2 y la linealidad. Se estudió la concordancia mediante el coeficiente Kappa y la correlación con el coeficiente Rho de Spearman. Se observó mayor sensibilidad diagnóstica para CLIA. El grado de acuerdo fue moderado y se obtuvo buena correlación entre los valores cuantitativos de CLIA y los títulos de CLIFT. De acuerdo al buen desempeño encontrado y a los resultados discordantes analizados, la mejor estrategia para la implementación de CLIA sería utilizarla en combinación con CLIFT, lo que aumentaría la sensibilidad diagnóstica sin perder especificidad.

Abstract The detection of anti-dsDNA antibodies is useful for diagnosis and clinical monitoring of patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and it is part of the classification criteria according to SLICC 2012. The purpose of this study was to verify the performance of the chemiluminescent immunoassay (CLIA) QUANTA Flash dsDNA and to compare it with the method currently in use, i.e the indirect immunofluorescence in Crithidia luciliae (CLIFT). One hundred and ninety five patients, who presented connective tissue diseases and required the study of anti-dsDNA antibodies, were analyzed. Thirty eight positive serum samples were obtained, 133 were negative and 24 (12.3%) in disagreement. Within the discordant results, there were 17 that corresponded to patients with SLE and they were grouped in 16 CLIA+/CLIFT- and 1 CLIA-/CLIFT+. The accuracy performance was assessed according to the EP15-A2 protocol and linearity. Concordance and correlation were calculated with the Kappa and Spearman's Rho coefficient, respectively. Based on the good performance observed and the discordant results analyzed, the best strategy for CLIA implementation would be to combine it with CLIFT, which would increase the diagnostic sensitivity without losing specificity.

Resumo A determinação dos anticorpos anti-dsDNA é de utilidade para o diagnóstico e seguimento clinico de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico (LES) e é um dos critérios de classificação do SLICC 2012. O objetivo do estudo foi verificar o desempenho do imunoensaio quimioluminescente (CLIA) QUANTA Flash dsDNA e compará-lo com o método em uso imunofluorescência indireta em Crithidia luciliae (CLIFT). Foram analisados com os dois métodos, 195 pacientes com diagnóstico de doenças do tecido conjuntivo e solicitude de anticorpos anti-dsDNA. Os resultados foram agrupados em 38 soros positivos, 133 negativos e 24 (12,3%) discordantes. Entre esses resultados discordantes, 17 corresponderam a pacientes com LES e se agruparam em 16 CLIA+/CLIFT- e 1 CLIA-/CLIFT+. Foi verificado o desempenho para precisão seguindo o protocolo EP15-A2 e a linearidade. Foi estudada a concordância mediante o coeficiente Kappa e correlação com o coeficiente Rho de Spearman. Observou-se maior sensibilidade diagnóstica para CLIA. O grau de acordo foi moderado e boa correlação foi observada entre os valores quantitativos de CLIA e os títulos de CLIFT. Com base no bom desempenho encontrado e nos resultados discordantes analisados, a melhor estratégia para implementar o CLIA seria utilizá-lo em combinação com o CLIFT, o que aumentaria a sensibilidade do diagnóstico sem perder a especificidade.

Estabilidad de analitos conservados en tubo cerrado con film versus cerrado con tapa plástica / Stability of analytes stored in a tube sealed with film versus closed with plastic cap

Introducción: El laboratorio debe garantizar la estabilidad de las muestras conservadas con la finalidad de una eventual confirmación de resultados o corregir posibles errores u omisiones al ingresar las solicitudes médicas. Con este objetivo se comparó la estabilidad de los analitos de muestras conservadas en el tubo primario selladas con film contra cierre con tapa plástica. Material y métodos: Veinticuatro muestras de sangre fueron alicuotadas en dos tubos primarios, uno cerrado con tapa plástica y otro con film. A ambas alícuotas se les midieron 26 analitos de química clínica durante siete días consecutivos, en un autoanalizador Cobas c 501 de Roche y se conservaron en refrigerador a 2-8°C. Se calcularon los coeficientes de variación y el error total. Los resultados obtenidos se compararon con el requisito de calidad respectivo establecido por el laboratorio. Conclusiones: Se observó una mayor variabilidad en los tubos cerrados con film respecto de los cerrados con tapa plástica. Todas las enzimas evaluadas cumplieron el requisito de calidad durante 4 días. A excepción del hierro todos los iones fueron estables solo un día. Los metabolitos fueron estables durante una semana a excepción de glucosa, proteínas totales, ácido úrico y albúmina. Se recomienda que cada laboratorio evalúe la estabilidad de los analitos en base a su forma de trabajo

Introduction: The laboratory must be able to guarantee the stability of stored patient samples for confirmation of results or errors in the interpretation of the medical request. The aim of this study was to evaluate the stability of the blood analytes preserved in tubes sealed with film versus a plastic cap. Material and methods: A total of 24 blood samples were aliquoted into two tubes; one sealed with film, and the other with a plastic cap. Twenty-six clinical chemistry analytes were measured for 7 consecutive days using a Roche Cobas c 501 autoanalyser. The samples were stored in a refrigerator between 2-8C. The total error and coefficient of variation were calculated, and the results were compared against the quality requirements of the laboratory. Conclusions: The variation was higher in the tubes sealed with film than in those with a plastic cap. Enzymes remained within the quality requirements for four days, and ions, apart from iron, were stable for only one day. The metabolites were stable for seven days excluding glucose, uric acid, total proteins, and albumin. It is suggested that each laboratory must evaluate the stability of analytes based on its workflow

Determinación de hierro sérico: Evolución del desempeño de los laboratorios participantes del Sub-Programa PEEC-Hematología / Iron serum determination: evolution of performance of participating laboratories of the PEEC-Hematology Sub-Program / Determinação de ferro sérico: Evolução do desempenho dos laboratórios participantes do Sub-Programa PEEC-hematologia

El objetivo de este trabajo fue determinar la evolución del desempeño analítico en la determinación de hierro sérico, de los laboratorios participantes del Sub- Programa PEEC-Hematología (PEEC-H) del Programa de Evaluación Externa de Calidad Prof. Dr. Daniel Mazziotta de la Fundación Bioquímica Argentina, mediante el análisis de los resultados de ferremia en 6 encuestas (E) realizadas en los meses de julio entre los años 2010 y 2015 (E 77, 81, 85, 89, 93 y 97). Hasta el 2011 se utilizaban métodos con y sin desproteinización, siendo estos últimos los más utilizados (94%). En 2015 en la red de laboratorios se emplearon solamente métodos directos sin desproteinización, siendo los colorimétricos los más utilizados (aproximadamente 95%). El Desvío Relativo Porcentual aceptable (DRPa) fue de ±10% en todas las encuestas analizadas. El 56% de los laboratorios tuvieron un desempeño promedio aceptable en las E 77, 81 y 85, evolucionando 3 años después, a 70% en las E 89, 93 y 97. Según estas consideraciones, al presente no es necesario ajustar el DRPa para el analito hierro, ya que con este valor los laboratorios aún deben trabajar para lograr una mejoría en su desempeño.

The aim of this work was to evaluate the evolution of the analytical performance of serum iron determination by the laboratories participating in the Sub- Program PEEC-Hematology (PEEC-H) EQAS Program Prof. Dr. Daniel Mazziotta of the Argentine Biochemical Foundation. To this end, results of serum iron determinations from July 2010 to July 2015 (surveys #77, 81, 85, 89, 93 and 97) were used. Up to 2011, there were methods both with and without deproteinization, the latter being the most used (94%). In 2015, only one commercial method without deproteinization was used, with colorimetric methods employed in 95% of the cases. In all the surveys analyzed, the acceptable DRP was ±10%. In surveys 77, 81 and 85, 56% of the laboratories had an acceptable performance percentage, and it evolved to a 70% in the surveys 89, 93 and 97, three years later. According to these considerations, there is no need to adjust the acceptable DRP for the iron analyte. In this way, laboratories will continue to work in order to improve their performance.

O objetivo deste estudo foi determinar a evolução do desempenho analítico na determinação de ferro sérico, dos laboratórios participantes no Sub-Programa PEEC-Hematologia (PEEC-H) do Programa de Avaliação Externa de Qualidade Prof. Dr. Daniel Mazziotta da Fundación Bioquímica Argentina, através da análise dos resultados de ferremia em 6 pesquisas de opinião (E) realizadas nos meses de julho entre os anos 2010 a 2015 (Pesquisa No. 77, 81, 85, 89, 93 e 97). Até 2011 eram empregados métodos com e sem desproteinização, sendo os colorimétricos os mais utilizados (aproximadamente 95%). O Desvio Relativo Percentual aceitável (DRPa) foi de ±10% em todas as pesquisas analisadas. 56% dos laboratórios tiveram desempenho médio aceitável nas pesquisas 77, 81 e 85, progredindo para 70% nas pesquisas de 89,93 e 97, 3 anos mais tarde. De acordo com estas considerações, hoje não é necessário ajustar o DRPa para o analito ferro, visto que com esse valor os laboratórios ainda devem trabalhar para alcançar uma melhoria no seu desempenho.

Valor diagnóstico de la morfología eritrocitaria en las anemias / Diagnostic value of red cell morphology in anemias / Valor diagnóstico da morfologia eritrocitária nas anemias

A pesar de la disponibilidad de modernos equipos automatizados, el estudio de la morfología eritrocitaria en extendidos de sangre periférica continúa desempeñando un rol fundamental en el diagnóstico de las anemias. En 2005, el Grupo Internacional de Consenso para la Revisión en Hematología publicó un documento con los criterios homogéneos de acción recomendados para la selección de los frotis sanguíneos que deben ser analizados mediante microscopía. Recientemente, el Comité Internacional de Estandarización en Hematología (ICSH) elaboró una serie de recomendaciones para unificar la nomenclatura y graduar los hallazgos morfológicos anormales en el estudio de la sangre periférica. El objetivo de este trabajo fue presentar a los lectores una revisión del tema y las últimas recomendaciones de los grupos de expertos a nivel nacional e internacional para el estudio de las anemias mediante la evaluación de la morfología eritrocitaria en el frotis de sangre periférica.

Despite the availability of modern automated equipment, the study of red cell morphology in peripheral blood smears continues to play a key role in the diagnosis of anemias. In 2005, the International Consensus Group for Hematology Review published a document with uniform criteria recommended action for the selection of blood smears to be analyzed by microscopy. Recently, the International Committee for Standardization in Hematology (ICSH) produced a series of recommendations to unify the nomenclature and graduate abnormal morphological findings in the study of peripheral blood. The aim of our work was to present readers with a review of the topic and the latest recommendations of the expert groups at national and international levels for the study of anemias by evaluating red cell morphology in the peripheral blood smear.

Apesar da disponibilidade de equipamentos automatizados modernos, o estudo da morfologia eritrocitária em esfregaços de sangue periférico continua a desempenhar um papel fundamental no diagnóstico das anemias. Em 2005, o Grupo Internacional de Consenso em Revisões Hematológicas publicou um documento com os critérios uniformes de ação recomendados para a seleção dos esfregaços sanguíneos que devem ser analisados através do microscópio. Recentemente, a Comissão Internacional de Padronização em Hematologia (ICSH) produziu uma série de recomendações para unificar a nomenclatura e graduar os achados morfológicos anormais no estudo do sangue periférico. O objetivo deste trabalho foi apresentar aos leitores uma revisão do tema e as últimas recomendações dos grupos de especialistas em nível nacional e internacional para o estudo de anemias através da avaliação da morfologia eritrocitária no esfregaço de sangue periférico.

Reactividad cruzada de una prueba de tamizaje para Enfermedad Celíaca con otros autoanticuerpos / Cross-reactivity of a screening test for celiac disease with other autoantibodies / Reatividade cruzada de um teste de screening para a doença celíaca com outros autoanticorpos

El objetivo del presente trabajo fue estudiar la presencia de reactividad cruzada de la prueba de tamizaje htTG/DGP para enfermedad celíaca (EC) con otros autoanticuerpos presentes en altos títulos en diferentes enfermedades autoinmunes (EA). Se realizó un estudio de corte transversal donde se seleccionaron 100 pacientes no celíacos, de ambos sexos (15 hombres, 85 mujeres) con edades entre 4 y 86 años que presentaban diversas EA. Para estudiar presencia de EC se realizaron por ELISA los ensayos QUANTALite® (INOVA Diagnostics, EE.UU.): htTG/DGPScreen, htTG IgA e IgG, Gliadina IgAII e IgGII. Los autoanticuerpos de otras EA se determinaron por inmunofluorescencia indirecta y por electroquimioluminiscencia. La reactividad cruzada encontrada con autoanticuerpos no específicos de EC fue de 2,0%. Las dos muestras positivas con la prueba de tamizaje (23,0 U y 24,9 U) presentaron anticuerpos anti-centrómero y anti-nucleares, con títulos 1/1280 y 1/640 respectivamente. Las mismas fueron analizadas para los marcadores de celiaquía y sólo una resultó positiva débil (21,8 U) para anti-Gliadina IgAII. La baja reactividad cruzada hallada con el ensayo de tamizaje htTG/DGP en presencia de otros autoanticuerpos permite concluir que dicha prueba constituye una herramienta de gran utilidad para la pesquisa de EC en pacientes con diferentes enfermedades autoinmunes.

The goal of this study was to show the presence of cross-reactivity screening test htTG/DGP for celiac disease (CD) with other autoantibodies present in high titers in different autoimmune diseases (AD). A cross-sectional study was performed for which 100 patients of both sexes (15 men, 85 women), aged between 4 and 86 years without CD who had different autoimmune pathologies were selected. To study the presence of CD, QUANTALite® (INOVA Diagnostics, USA): htTG/DGP Screen, htTG IgA and IgG, Gliadin IgAII and IgGII tests by ELISA were used. Other autoantibodies from AD were determined by indirect immunofluorescence and by electrochemiluminescence. Cross-reactivity with non-specific autoantibodies found in EC was 2.0%. The two positive samples of screening test (23,0 U and 24,9 U) had anti-centromere antibodies 1/1280 and anti-nuclear antibodies 1/640 respectively. They were analyzed for celiac disease markers and only one was weak positive (21,8 U) for anti-Gliadin IgAII. The low cross reactivity found with screening test htTG/DGP in the presence of other autoantibodies made it possible to conclude that this test is a useful tool for screening of CD in patients with different autoimmune diseases.

O objetivo deste trabalho foi estudar a presença de reatividade cruzada do teste de screening htTG/ DGP para a doença celíaca (DC) com outros autoanticorpos presentes em altos títulos em diferentes doenças autoimunes (DA). Foi realizado um estudo transversal para o qual foram selecionados 100 pacientes não-celíacos, de ambos os sexos (15 homens, 85 mulheres), com idades entre 4 e 86 anos que apresentavam diferentes patologias autoimunes (DA). Para estudar a presença de DC, realizaram-se por ELISA os ensaios QUANTALite® (INOVA Diagnostics, EUA): htTG/DGPScreen, htTG IgA e IgG, Gliadina IgAII e Gliadina IgGII por ELISA. Os autoanticorpos das outras DA foram determinados por imunofluorescência indireta e por eletroquimioluminescência. A reatividade cruzada encontrada com outros autoanticorpos não específicos de DC foi de 2,0%. As duas amostras positivas para o teste de screening (23,0 U e 24,9 U) apresentaram anticorpos anticentrômeros e antinucleares, com títulos 1/1280 e 1/640 respectivamente. Elas foram analisadas para os marcadores de doença celíaca e apenas uma resultou positiva fraca (21,8 U) para anti-Gliadina IgAII. A baixa reatividade cruzada encontrada com o teste de screening htTG/DGP em presença de outros autoanticorpos, permite concluir que este teste constitui um instrumento de grande utilidade para a pesquisa de doença celíaca em pacientes com diferentes doenças autoimunes.

Evaluación de los niveles de lípidos y del estado de insulinorresistencia en pre- y postmenopáusicas / Evaluation of lipid levels and insulin resistance in pre- and postmenopausal women / Avaliação dos níveis de lipídios e do estado de resistência à insulina em pré- e pós-menopausa

El objetivo del trabajo consistió en evaluar la relación entre los niveles de lípidos y parámetros que definen el estado de insulinorresistencia con la edad, el estado menopáusico (EM) y el índice de masa corporal (IMC) en la pre- y postmenopausia. En este estudio de corte transversal se seleccionaron 89 mujeres: 42 premenopáusicas (Pre) y 47 postmenopáusicas (Post). Se midieron: FSH, LH, estradiol e insulina por MEIA, colesterol total (CT), triglicéridos (TG), colesterol de lipoproteínas de baja densidad (C-LDL), colesterol de lipoproteínas de alta densidad (C-HDL) y glucosa por métodos químicos convencionales. El colesterol de LDL pequeñas y densas (C-LDLpyd) se obtuvo por cálculo. Las pacientes Post mostraron niveles más elevados de CT (p<0,0001), C-LDL (p<0,0001), C-HDL (p=0,0283), TG (p=0,0014), C-LDLpyd (p=0,0001), CT/C-HDL (p=0,0016) y glucosa (p=0,0048) que las Pre. No se hallaron diferencias significativas en los valores de insulina ni del índice TG/C-HDL. El análisis de regresión múltiple mostró que los valores de CT, C-LDL y C-HDL se relacionaron lineal y positivamente con la edad. Los niveles de C-LDL medido, TG, CT/C-HDL, C-LDLpyd, glucosa, insulina y TG/C-HDL se asociaron positivamente con IMC. C-HDL se relacionó negativamente con IMC. Sólo el C-LDLpyd presentó linealidad positiva con el EM.

The purpose of this study was to evaluate the relationship between lipid levels and insulin resistance parameters with age, menopausal status (MS) and body mass index (BMI) in pre- and postmenopausal women. This cross-sectional study included 89 women: 42 premenopausal (Pre) and 47 postmenopausal (Post). FSH, LH, estradiol and insulin were measured by MEIA. Total-cholesterol (TC), triglycerides (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C), low density lipoprotein cholesterol (LDL-C), and glucose were measured by conventional clinical chemistry methods. Small and dense LDL-C (sdLDL-C) was estimated by calculation. Post women showed higher values of TC (p<0.0001), LDL-C (p<0.0001), HDL-C (p=0.0283), TG (p=0.0014), sdLDL-C (p=0.0001), TC/HDL-C ratio (p=0.0016) and glucose (p=0.0048) than Pre. Insuline and TG/HDL-C ratio were not different between groups. Multiple regression analysis showed TC, LDL-C and HDL-C levels to be linearly and positively associated to age. Measured LDL-C, TG, TC/HDL-C ratio, sdLDL-C, glucose, insulin and TG/HDL-C ratio showed linear and positive relationship with BMI. HDL-C was negatively associated to IMC. Only sdLDL-C concentrations were associated positively to MS.

O objetivo deste trabalho é avaliar a relação entre os níveis de lipídios e parâmetros que definem o estado de resistência à insulina com a idade, estado menopausal (EM) e índice de massa corporal (IMC) na pré- e pós-menopausa. Neste estudo de corte transversal, foram selecionadas 89 mulheres: 42 pré-menopausa (Pré) e 47 pós-menopausa (Pós). Foram medidos: FSH, LH, estradiol e insulina pelo MEIA. Colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), colesterol de lipoproteínas de baixa densidade (C-LDL), colesterol de lipoproteínas de alta densidade (C-HDL) e glicose através de métodos químicos convencionais. O colesterol de LDL pequenas e densas (C-LDLpyd) foi obtido por cálculo. Pacientes Pós-menopausa apresentaram níveis mais altos de CT (p<0,0001), C-LDL (p<0,0001), C-HDL (p=0,0283), TG (p=0,0014), C-LDLpyd (p=0,0001), CT/C-HDL (p=0,0016) e glicose (p=0,0048) do que as Pré-menopausa. Não foram encontradas diferenças significativas nos valores de insulina nem do índice de TG/C-HDL. A análise de regressão múltipla mostrou que os valores de CT, C-LDL e C-HDL foram linear e positivamente relacionados com a idade. Os níveis de C-LDL medido, TG, CT/C-HDL, C-LDLpyd, glicose, insulina e TG/C-HDL foram associados positivamente com IMC. C-HDL se relacionou negativamente com IMC. Apenas o C-LDLpyd apresentou linearidade positiva com o EM.

Desempeño analítico de un método cromatográfico para la cuantificación de hemoglobina glicosilada / Analytical performance of a chromatographic method for the quantitation of glycated hemoglobin / Desempenho analítico de um método cromatográfico para a quantificação da hemoglobina glicosilada

La determinación de la hemoglobina glicosilada (HbA1C) ha sido propuesta en el año 2010 por la American Diabetes Association (ADA) como criterio diagnóstico de diabetes mellitus, siendo fundamental para el control y seguimiento de la glucemia a largo plazo. En este contexto, el laboratorio debe garantizar el cumplimento de los requisitos internacionales de calidad de forma de asegurar que el cambio en el resultado de HbA1C entre dos determinaciones sucesivas de un paciente sean el reflejo de una variación clínica y no de una variación analítica. En este trabajo se evaluó el desempeño analítico de un método cromatográfico, procesando controles comerciales provistos por el fabricante. Se calcularon el coeficiente de variación total, sesgo, error total, valor de referencia para el cambio y el cambio clínico significativo para el punto crítico de 7,0%-NGSP. El método evaluado cumplió con todos los requisitos internacionales de calidad establecidos, lo que permitiría asignar el cambio de la concentración de HbA1C en dos determinaciones sucesivas de un paciente, como debido a una modificación en la condición clínica del mismo y no a la variabilidad analítica...